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Frammentazione del DNA degli spermatozoi: il prezzo e i benefici del test

Test per la frammentazione del DNA da parte degli spermatozoi usando il metodo TUNEL - un test per la rilevazione del danno al DNA negli spermatozoi. L'analisi aiuta a valutare la funzione fertile e identificare le cause di infertilità e aborti spontanei.

Lo studio viene eseguito solo in combinazione con lo studio dell'eiaculato * (servizio 36.100 spermogramma).

* Se lo spermogramma è stato eseguito non più tardi di 2 giorni fa, puoi prendere TUNEL senza riesaminare l'eiaculato (servizio 36.100 Spermogramma). Assicurati di fornire il risultato dello sperma in laboratorio.

testimonianza

  • infertilità della genesi non chiara con spermogrammi normali,
  • coniuge di gravidanza non in via di sviluppo,
  • tentativi infruttuosi di utilizzare tecnologie riproduttive assistite (IVF, ICSI, IMSI) nella storia,
  • tarda età paterna
formazione
Lo spermogramma passa dopo l'astinenza sessuale. Il periodo di astinenza raccomandato è di 2-7 giorni. Durante il periodo di preparazione non è permesso bere alcolici in quantità.

Per 7-10 giorni è necessario escludere farmaci, procedure con surriscaldamento (UHF, sauna, bagno).

Il giorno che precede l'analisi, è auspicabile escludere un forte stress fisico e psicologico.

Dopo aver eseguito un massaggio, la prostata dovrebbe impiegare almeno 3 giorni.

Se durante il periodo di preparazione ci sono stati raffreddori o altre malattie acute accompagnate da un aumento della temperatura, si dovrebbe rifiutare di eseguire lo studio.

Condizioni di cattura
L'eiaculato viene raccolto dalla masturbazione in un contenitore di plastica sterile. L'uso del preservativo non è permesso.

Per ottenere risultati di ricerca corretti, è necessario raccogliere tutto il materiale ottenuto.

Valori di riferimento: il contenuto di spermatozoi con rottura del DNA non supera il 15%.

Cause di cambiamenti patologici:

  • disturbi congeniti (geneticamente determinati) della spermatogenesi (deficit di protamina),
  • esposizione a fattori nocivi (vari tipi di radiazioni, assunzione di determinati farmaci, assunzione sistematica di alcool, avvelenamento da piombo, avvelenamento da mercurio),
  • malattie infiammatorie croniche degli organi riproduttivi (prostatite, vescicolite),
  • varicocele,

Eziologia del danno al DNA

Il meccanismo fisiologico di frammentazione (rottura della struttura) del DNA non è completamente compreso. Le probabili cause di difetti nel componente chiave del gamete maschile sono:

  • apoptosi,
  • fallimenti nel rimodellamento della cromatina,
  • stress ossidativo.
  • Un numero di fattori esterni può provocare disturbi intracellulari:

    1. Infezioni del tratto genitale. L'infezione degli organi riproduttivi maschili con batteri patogeni porta all'infiammazione e provoca un'aumentata produzione di globuli bianchi. Questo processo è accompagnato dall'ossidazione del DNA delle cellule che violano la loro integrità.
    2. Mancanza di eiaculazioni regolari. C'è un equivoco comune che se "salva il seme" e non eiacula, allora ci sarà più sperma, che aumenterà le possibilità di fecondazione. Questo non è assolutamente il caso. Con l'eiaculazione trattenuta, lo sperma sarà esposto allo stress ossidativo più a lungo e, di conseguenza, avrà una maggiore quantità di danni al DNA. È meglio eiaculare ogni 2-3 giorni al fine di preservare la sequenza del DNA.
    3. Surriscaldamento. Non è senza motivo che i testicoli si trovano sul lato esterno del corpo: l'alta temperatura non contribuisce alla produzione ottimale di sperma. . L'ipertermia indesiderata può essere causata da posture scomode, indumenti stretti, alcune attività professionali (cottura, saldatura a gas, avtovozhdenie), trattamenti termali caldi, l'abitudine di tenere il portatile sulle ginocchia. L'aumento della temperatura dei testicoli è stato osservato in alcune malattie (testicolo non diagnosticato, varicocele).
    4. Kofeinomaniya. Gli studi hanno dimostrato che il consumo giornaliero di 300 mg di caffeina (3 o più tazze di caffè) è irto di integrità del DNA spermatico compromessa. Come si è scoperto, la caffeina è un potente inibitore del processo di riparazione del DNA.
    5. Uso di droghe e alcuni farmaci. Comprovata relazione di infertilità maschile con l'uso di marijuana, cocaina, metanfetamine, oppioidi, steroidi anabolizzanti. Anche l'uso a breve termine di queste sostanze può portare ad una diminuzione della qualità dello sperma e della libido. L'uso cronico di farmaci aumenta le probabilità di danno spermatico a livello molecolare. Nel caso della dipendenza da cocaina, gli effetti residui possono essere osservati entro due anni dal momento dell'ultimo utilizzo. Notevole pericolo per la spermatogenesi sono i farmaci utilizzati nella chemioterapia, nel trattamento dell'ipertensione, della gotta, dell'aumento dell'acidità gastrica, dell'infiammazione delle vie urinarie. Il gruppo di farmaci dannosi per la fertilità maschile comprende alcuni tipi di antibiotici, anticonvulsivanti, farmaci che conservano liquidi e metadone.
    6. Abuso di tabacco e alcol. Sebbene alcuni studi abbiano rilevato che alcuni tipi di bevande contenenti alcol (ad esempio il vino rosso) hanno un effetto antiossidante, è anche dimostrato che il consumo di due o più bicchieri di alcol al giorno influisce negativamente sul materiale genetico dello sperma. Non meno distruttivo per il DNA della nicotina dei gameti maschili.
    7. Diete irrazionali L'esercizio fisico regolare dovrebbe aiutare a mantenere una forma fisica sana, piuttosto che debilitare le restrizioni dietetiche. La genesi dello sperma normale richiede un adeguato rifornimento di nutrienti.
    8. Inquinanti ecologici. L'impatto ambientale di sostanze tossiche come diossina, pesticidi, erbicidi, provoca danni al DNA degli spermatozoi. L'esposizione professionale a metalli, vernici, solventi, sgrassanti, adesivi a base d'acqua può anche degradare la qualità del DNA.
    9. Vecchiaia Le analisi spermatiche dei pazienti dopo i 40 anni indicano una tendenza verso un aumento della frammentazione del DNA, nonché un aumento delle mutazioni genetiche e delle anomalie cromosomiche.
    10. Radiazione elettromagnetica. L'uso di gadget elettronici nella vita di tutti i giorni, in particolare i telefoni cellulari, è una seria minaccia per il sistema riproduttivo degli uomini.

    La maggior parte di questi fattori di rischio contribuisce all'intensa ossidazione dei gameti maschili. Questo porta allo stress ossidativo - una condizione in cui il livello del potenziale protettivo delle cellule non è sufficiente per resistere ai radicali liberi dannosi.

    Conseguenze di difetti nella componente genetica

    Le interruzioni nelle catene di DNA dello sperma sono piene di gravi minacce alla fertilità:

  • violazione del processo di fertilizzazione,
  • un rallentamento nello sviluppo della blastocisti,
  • deterioramento dell'impianto di embrioni,
  • aborti frequenti.
  • A volte le uova femminili mostrano la capacità di ripristinare lo sperma con il DNA frammentato. Tuttavia, una tale "ricostruzione" è impossibile con un ampio quadro di frammentazione o un ovocita di bassa qualità.

    Esame spermatologico a livello molecolare

    Lo sviluppo della microbiologia e della genomica ha reso possibile lo sviluppo di una serie di metodi per lo studio dello stato molecolare dei gameti maschili. Ogni test di laboratorio per la frammentazione del DNA dello sperma (dal seguente) ha trovato ampia applicazione in andrologia e riproduzione:

    1. TUNEL - studio dello sperma al microscopio usando l'effetto ottico-ottico. I nucleotidi marcati vengono aggiunti al campione spermatico. Questi identificano in modo inequivocabile i luoghi delle rotture del DNA e si incuneano in essi, a seguito delle quali le cellule alterate si trovano incandescenti. Il loro contenuto nell'eiaculato è determinato contando ed espresso in percentuale.
    2. SCD - analisi della decondensazione della cromatina (allentamento) nei nuclei delle cellule. All'interno di una cellula sana, questa sostanza è più vicina al centro del nucleo e, in una cellula danneggiata, ulteriormente. Gli enzimi sono usati come marker di definizione. Grazie a loro, le teste dello sperma con il DNA si spezza "si accendono", visualizzando così l'immagine del danno.
    3. SCSA è lo studio della struttura della cromatina utilizzando un marcatore di DNA fluorescente. Gli spermatozoi macchiati da esso passano attraverso un raggio laser, che fa brillare le cellule in diversi colori, a seconda del grado di danneggiamento del DNA: verde - normale, giallo - difetti moderati, rosso - cambiamenti critici.

    Il risultato dell'analisi genetica dello sperma è noto come indice di frammentazione del DNA dello spermatozoo. Il suo valore soglia in un uomo sano è del 15-20%.

    Mostrando il livello di spermatozoi con DNA frammentato, i test molecolari consentono una valutazione oggettiva del potenziale di fertilità del paziente:

  • ≤ 15% - la presenza di un problema minore
  • > 16% ≤ 49% - aumentato rischio di subfertilità,
  • > 50% - alto rischio di infertilità.
  • Indicazioni per il test del DNA

    L'analisi genetica high-tech dei gameti è un'utile fonte di informazioni per alcune patologie maschili: ereditaria (fibrosi cistica) o acquisita (varicocele). Ma principalmente il test del DNA è prescritto durante una serie di fallimenti nel trattamento della sterilità:

  • lento sviluppo della blastocisti o dell'embrione,
  • diversi tentativi infruttuosi di IVF / ICSI
  • aborti ricorrenti con una compagna
  • infertilità idiopatica.
  • Come dimostra la pratica, tra i candidati per il test del DNA sono più spesso gli uomini:

  • vecchiaia
  • con parametri spermatici insoddisfacenti (che spesso sono correlati alla frammentazione del DNA),
  • regolarmente esposto a sostanze nocive.
  • Modi per regolare la frammentazione del DNA

    A seconda di cosa abbia causato la discontinuità delle catene del DNA, vengono scelti i metodi per ripristinarne l'integrità. Il corso terapeutico è sviluppato individualmente per ciascun paziente.

    Possibili opzioni di trattamento:

  • terapia antibiotica: quando viene rilevata un'infezione,
  • cambiamento dello stile di vita: evitare dipendenze (droghe, fumo, alcol, caffeina), cambiare professione,
  • terapia dietetica - l'inclusione nella dieta di cibi freschi, specialmente quelli che contengono antiossidanti e vitamine C ed E,
  • chirurgia varicocele,
  • aspirazione testicolare degli spermatozoi per concepimento in vitro (diversamente dal danno al DNA osservato nell'eiaculato, il contenuto dei testicoli può non essere influenzato dalla patologia fisiologica),
  • terapia antiossidante.
  • Dato che la riproduzione di nuovo sperma si verifica periodicamente (una volta al trimestre), è possibile giudicare l'efficacia del corso terapeutico solo 3 mesi dopo l'inizio del trattamento.

    conclusione

    Il contributo paterno alla fertilizzazione, allo sviluppo embrionale e all'emergere di una prole sana è di fondamentale importanza. Pertanto, per implementare la funzione fertile, alcuni pazienti sono vivamente consigliati di sottoporsi all'esame dello sperma a livello del DNA.

    I test molecolari possono fornire preziose informazioni sullo stato dei gameti di un uomo. L'importante è affidare questo importante strumento diagnostico e il successivo trattamento a un medico professionista.

    Indicazioni per l'analisi

    Per identificare la rottura della catena di DNA dello sperma, viene effettuato un test speciale. Lo spermogramma in questo caso non è informativo. Mostra solo la concentrazione di spermatozoi nell'eiaculato, la loro attività. Il test di frammentazione è mostrato:

    • con l'infertilità maschile, se non ci sono altri fattori che lo provocano,
    • se i tentativi di inseminazione artificiale falliscono,
    • aborti ricorrenti
    • se l'embrione è di scarsa qualità,
    • uomini di 45 anni,
    • dopo crioconservazione del campione spermatico prima della fecondazione in vitro (fecondazione in vitro),
    • con le vene varicose del cavo spermatico,
    • se entro tre mesi si verificava un aumento della temperatura corporea.

    Inoltre, la procedura deve essere sottoposta a uomini che lavorano in condizioni di alto rischio.

    Come viene eseguita l'analisi?

    Per verificare l'integrità del DNA spermatico viene effettuato il tunel-test, che prevede un esame microscopico dello sperma. Il paziente deve raccogliere il campione di sperma in uno speciale contenitore sterile con un coperchio. È importante! Un preservativo non è adatto a questo scopo, poiché i componenti che contiene possono avere un effetto negativo sulla motilità degli spermatozoi. Inoltre, quando si trasporta un contenitore con materiale genetico, è necessario osservare il regime di temperatura, che è un intervallo di temperatura compreso tra +27 e +37 gradi Celsius.

    Per ottenere un risultato accurato, l'analisi deve essere eseguita entro un'ora dal momento in cui il campione è stato prelevato. Per questo, il tecnico aggiunge un reagente all'eiaculato. Lui, reagendo con liquido seminale, riempie le rotture del DNA con un nucleotide fluorescente, rendendo visibili gli spermatozoi frammentati. L'assistente di laboratorio esegue il loro calcolo, che è indicato come percentuale.

    Per ottenere un'immagine completa, un esame al microscopio elettronico e uno spermogramma vengono eseguiti in parallelo.

    Preparazione del test TUNEL

    Per rendere il test il più accurato possibile, è necessario prendere 2-7 giorni prima di prelevare il campione: astenersi da rapporti sessuali, prendere medicine, visitare bagni. È importante osservare la dieta, evitare l'alcol, non fumare. Prima di raccogliere lo sperma, l'urea deve essere svuotata.

    Quando si ripete l'analisi, si raccomanda di osservare la sequenza e la durata delle attività preparatorie, in quanto ciò potrebbe influire sul risultato.

    trascrizione

    Dopo l'analisi, il risultato viene fornito con l'indice di test e un'istantanea su cui sono registrati gli spermatozoi frammentati. L'indice è il rapporto tra materiale genetico danneggiato e sano e fertilizzabile. Normalmente, l'indicatore non dovrebbe essere superiore al 15%. Questo suggerisce che lo spermatozoo con una catena di DNA spezzata è meno che sano, quindi la salute riproduttiva di un uomo è in ordine e c'è un'alta probabilità di concepimento naturale.

    Quando l'indice è superiore al 15%, ma inferiore al 30%, rimane naturalmente la possibilità di fertilizzare l'uovo, ma questo può richiedere molto tempo.

    Se il numero di spermatozoi danneggiati nell'eiaculato è del 30-50%, gli esperti ritengono che la gravidanza sia naturalmente improbabile, pertanto, è raccomandata la FIV (fecondazione in vitro), l'inseminazione intrauterina (tecnica riproduttiva, che prevede l'introduzione di spermatozoi sani e preselezionati nel canale cervicale). ICSI. Quindi, con un indice superiore al 30%, i medici della fertilità raccomandano l'IVF. Se il materiale genetico frammentato è pari o superiore al 50%, la fecondazione in vitro è inefficace. Si consiglia di applicare l'iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI). Con un indice del 60% o superiore, le probabilità di una fertilizzazione riuscita sono minime. Viene eseguita ICSI o viene prelevato lo sperma del donatore.

    Fino a poco tempo fa, non era possibile identificare gli spermatozoi danneggiati, per non parlare di curarli. Oggi questo problema è curabile. L'introduzione di tecniche mediche innovative consente di ripristinare con successo il DNA spermatico frammentato.

    Per fare ciò, è necessario eliminare o limitare l'impatto dei fattori che provocano l'infertilità maschile: eccesso di peso, abitudini dannose (fumo, alcol), esposizione a sostanze tossiche e chimiche (che lavorano in industrie pericolose). Il secondo stadio è una diagnosi completa, l'eliminazione di vari processi infiammatori nel corpo, comprese le malattie del sistema riproduttivo maschile. In parallelo, trattamento con farmaci antibatterici e antinfiammatori (se necessario). Complessi vitaminici, antiossidanti devono essere assegnati per ripristinare la salute degli uomini e promuovere la formazione di sperma sano.

    La durata del trattamento può essere 3-6 mesi. A volte potresti aver bisogno di più. Se la terapia è inefficace e il numero di spermatozoi sani non supera il 20-30%, i medici offrono il servizio ICSI alla coppia. Pertanto, gli specialisti della riproduzione selezionano artificialmente materiale genetico sano e fertile dall'eiaculato. Quindi è piantato nell'uovo di una donna.

    Nel caso di un gran numero di spermatozoi con DNA frammentato, viene anche eseguita un'operazione per estrarli direttamente dai testicoli. Ciò è dovuto al fatto che durante l'eiaculazione aumenta la percentuale di cellule danneggiate.

    Costo dell'analisi per la frammentazione del DNA:

    Il danno al DNA dello sperma è associato ai parametri dello sperma: una diminuzione della concentrazione, della motilità e della proporzione di sperma normale. Allo stesso tempo, nel 10-20% dei casi, possono verificarsi con la "normozoospermia".

    La causa principale del danno al DNA è stress ossidativo dello spermacausato da un'eccessiva produzione di specie reattive dell'ossigeno (vedi figura di Aitken RJ et al., 2014).

    Un altro motivo è l'apoptosi incompleta degli spermatozoi, associata a spermatogenesi alterata e spermatogenesi e / o l'eliminazione di forme difettose nell'epididimo.

    suAitken RJ et al. // Asian J Androl.2014, 16 (1): 31.

    Il danno del DNA spermatico è un processo multifattoriale che dipende sia dalla predisposizione genetica sia da fattori esterni dannosi (fumo, surriscaldamento, sostanze tossiche, ecc.).

    Poiché questo può avere diverse cause, la valutazione della frammentazione, dello stress ossidativo e dei disturbi della condensazione della cromatina (confezione) sono particolarmente raccomandati per:

    coppie con aborti spontanei,

    coppie con infertilità inspiegabile per più di 6 mesi,

    uomini sopra i 40 anni

    пациентов с варикоцеле,

    пациентов с системными заболеваниями (диабет, ожирение и др.),

    мужчин с вредными факторами образа жизни (курение, ионизирующее излучение, токсические вещества, перегревание, в т.ч. при использовании облегающей одежды, несбалансированное питание и др.),

    мужчин с историей рака и химиотерапией,

    мужчин, проходящих лечение некоторыми рецептурными препаратами,

    у мужчин, перенесших урогенитальные инфекции,

    плохом качестве эмбриона во время повторных циклов донорства яйцеклеток,

    мужском идиопатическом бесплодии.

    Для обнаружений повреждений ДНК в сперматозоидах используют различные методы: дисперсии хроматина в агарозном геле (SCD), электрофореза ДНК после денатурации (COMET), терминальной метки (TUNEL) и др.

    Nella tabella abbiamo riassunto i principi e le interpretazioni dei test più utilizzati.

    Le dimensioni dei risultati

    Il metodo TDT-etichetta media DUTP-end della rottura della catena del DNA (metodo TUNEL)

    Misura il grado di danno del DNA inserendo un DNA sonda (nucleotide modificato) nel sito di danno del DNA.

    La proporzione di spermatozoi con danno al DNA, che sono nucleotidi modificati, incorporati nello spazio del DNA

    Analisi della struttura della cromatina dello sperma (metodo SCSA)

    Misura della suscettibilità del DNA alla denaturazione

    Il numero di spermatozoi con DNA frammentato in%

    Analisi della dispersione dello spermatozoide (metodo SCD)

    Misura della suscettibilità del DNA alla denaturazione

    Il numero di spermatozoi con DNA frammentato,%

    DNA comet assay (COMET)

    Misura della suscettibilità del DNA alla denaturazione

    Il grado di frammentazione del DNA in una singola cellula spermatica è stimato dalla percentuale di DNA nella coda della cometa, nella lunghezza della coda e nell'intensità del colore.

    Colorazione con blu anilina e cromomicina A3

    Misurazione del livello di compattazione della cromatina spermatica sulla base del rapporto istone-protamina

    Il numero di spermatozoi con compattazione bassa della cromatina,%

    Indice G0 + G1 + G2x2 inferiore a 40

    Storicamente, più di 35 anni fa, il metodo SCSA è stato utilizzato per valutare la frammentazione del DNA. Per scopi scientifici, il metodo più comunemente usato è TUNEL, che può rilevare sia rotture a singolo filamento che rotture a doppio filamento di DNA. Il più moderno e conveniente per uso clinico è il metodo SCD, alcuni lo considerano anche il più sensibile.

    La condensazione (confezionamento) della cromatina degli spermatozoi viene valutata dal rapporto tra le proteine ​​istone e protamina negli spermatozoi, per le quali viene utilizzata la colorazione con anilina blu e cromomicina A3.

    Foto originali del nostro laboratorio:

    A- TUNEL, B-SCD, B-istoni / Protamine

    Il rilevamento di una maggiore frammentazione del DNA degli spermatozoi richiede un trattamento volto ad eliminare il fattore patogenetico sospetto: processi infiammatori infettivi e persino il trasporto asintomatico di infezioni come Chlamydia trachomatis, Mycoplasma sp., Ureaplasmaurealyticum, alcuni sierotipi di E. coli, ecc., Surriscaldamento delle uova. compreso associato a varicocele), fumo, azioni di alcuni farmaci (paroxetina, miloxan, pentossiflina, ecc.), sovrappeso, metabolismo dei carboidrati, ecc. In caso di rilevamento dello stress ossidativo - supplemento nessun uso di diverse sostanze nutritive, antiossidanti. Nei casi più difficili, può essere utile ottenere gli spermatozoi direttamente dai testicoli, dove sono protetti dall'azione dei radicali attivi. barriera emato-testicolare. Ma in questo caso, i successivi insuccessi della ICSI della FIVET possono essere associati a una violazione della confezione della cromatina, poiché la sostituzione degli istoni con le protamine necessarie per la completa maturazione degli spermatozoi si verifica già nell'epididimo.

    Negli ultimi anni, le moderne tecnologie cellulari sono state utilizzate abbastanza efficacemente per normalizzare la struttura della cromatina spermatica, incluso associato all'uso di cellule MSC e Sertoli.

    Dott. Med. Scienze, Professore V.A. Bozhedomov

    Alcune citazioni sul significato della frammentazione del DNA spermatico:

    "... Negli spermatozoi negli uomini con oligozoospermia, il danno al DNA aumenta. Questo aumento è associato ad una diminuzione delle probabilità di una gravidanza naturale e ad un aumento della probabilità di una perdita precoce della gravidanza ... "

    Male Infertility / A. Jungwirth (Chair) et al. ©

    Associazione europea di urologia, 2017: 14.

    "... Esistono due tipi di frammentazione del DNA spermatico, uno dei quali dipende dai parametri dello spermogramma e il secondo no. "

    Muratori M. et al. / / Hum. Reprod., 2008, V23 (5), P. 1035-1043.

    "... Gli spermatozoi difettosi contenenti DNA danneggiato conservano la capacità di concimare. Tuttavia, alcuni fenotipi di infertilità sono associati a tale danno al DNA, per esempio infertilità inspiegata e idiopatica, ripetute VMI e FIV fallite e aborti abituali. Inoltre, un rischio più elevato di cancro e difetti di trasmissione nella prole è associato a danni al DNA dello sperma ... "

    A. Zini, A. Agarwal (a cura di), 2011, Springer, 512. Cromatina dello sperma: applicazione biologica e clinica nell'infertilità maschile e nella riproduzione assistita.

    "... Tra le molte ragioni attualmente pensate per causare una disfunzione delle cellule spermatiche, il danno al DNA nucleare è il più studiato e sempre più riconosciuto come un fattore chiave che influenza la qualità dell'embrione, il suo sviluppo e l'impianto ..."

    Mallidis C. et al. // Hum Reprod., 2010, V.26, N7, P.1641-1649

    "... Gli spermatozoi con DNA frammentato possono fecondare ovociti maturi, ma l'attivazione del genoma dei padri può interrompere lo sviluppo embrionale, portando a perdite preimpianto e postimpianto. Questo tipo di danno può verificarsi negli embrioni con normale complemento cromosomico e può spiegare perché alcuni embrioni di cariotipo normali non sono in grado di fornire una gravidanza in pazienti con aborti spontanei non spiegati. In generale, più il grado di danno del DNA viene trasmesso all'embrione dal genoma paterno, prima questo danno si manifesterà durante lo sviluppo dell'embrione ... "

    Bareh Gihan M. et al. // Fertility and Sterility, 2016, 105 (2): 15-282

    "... Recenti studi hanno dimostrato l'importanza dell'integrità del DNA dello sperma come un fattore importante che influenza la competenza funzionale dello sperma. Pertanto, la rilevazione della frammentazione del DNA dello spermatozoo può essere clinicamente utile come parte del processo di valutazione della fertilità ... I test di frammentazione del DNA dello sperma non hanno praticamente alcuna differenza nel valore previsto tra IVF e ICSI ... "

    Cissen M et al. Misurazione della frammentazione del DNA spermatico e risultati clinici: una revisione sistematica e meta-analisi. PLoS One. 10 novembre 2016 11 (11): e0165125.

    "... Gli attuali modelli animali e dati di estrapolazione negli studi sull'uomo sollevano preoccupazioni circa i problemi di salute nella prole ottenuta dallo sperma con un aumento del livello di frammentazione del DNA. "

    Bach PV, Schlegel PN. Danni al DNA dello spermatozoo e IVSI e ICSI. Clinica di base Androl. 2016, 5 (26): 15.

    "... L'esclusivo processo di compattazione della cromatina nella cellula spermatica ha importanti implicazioni per lo sviluppo di test di screening dell'infertilità maschile e per la comprensione delle caratteristiche della cromatina spermatica, che può influenzare i risultati delle tecnologie di riproduzione assistita. "

    Palermo GD et al. Prospettive sulla valutazione dell'integrità della cromatina dello sperma umano. Fertil Steril. 2014 Dec, 102 (6): 1508-17.

    “…Una meta-analisi con un effetto casuale bidimensionale ha prodotto una AUC (area sotto la curva) di 0,92 con una sensibilità (intervallo di confidenza del 95%) di 0,80 (0,78-0,82) e una specificità di 0,83 (0,80-0, 86) per utilizzare il test SDF nel differenziare gli uomini infertili dal normale controllo fertile. Inoltre, l'analisi dei sottogruppi ha mostrato che l'analisi SDF con un singolo test TUNEL ha prodotto una AUC di 0,9506 con una sensibilità combinata di 0,77 (0,74-0,8) e una specificità di 0,91 (0,87-0,94), mentre i test SCD e Comet hanno mostrato una sensibilità combinata di 0, 77 (0,67-0,81) o 0,91 (0,88-0,94) e specificità di 0,84 (0,75-0,91) o 0,63 (0,54-0,70) accompagnato da un AUC di 0,84 o 0,94 ... "

    Cui ZL et al. Precisioni diagnostiche di TUNEL, SCD e test di frammentazione del DNA dello sperma basati su comete per infertilità maschile: uno studio di meta-analisi. Clin Lab. 2015, 61 (5-6): 525-35.

    Qual è il test HALO per valutare la frammentazione del DNA?

    Nel laboratorio di SPERMA-TEST.ru, l'indice di frammentazione del DNA viene determinato utilizzando il metodo HALO (HALOSPERM).

    A differenza di altri metodi di analisi della frammentazione del DNA dello sperma, il metodo HALO rileva e "evidenzia" non danneggiato, ma tutto il DNA. Un alone è formato intorno allo sperma "sano" con DNA intatto, che è chiaramente visibile su un microscopio ottico. Non ci sono aloni simili negli uomini con DNA danneggiato.

    L'analisi dell'indice di frammentazione del DNA delle cellule spermatiche viene eseguita 30-60 minuti dopo la diluizione dell'eiaculato. Nell'analisi sono stimati da 200 a 500 spermatozoi con code.

    Disponibilità: 1-3 giorni lavorativi

    Test per la frammentazione del DNA di sperma: foto da un microscopio

    Gli spermatozoi con una molecola di DNA intatta hanno un chiaro alone ampio. Gli spermatozoi con frammentazione del DNA (interruzioni) non hanno tale alone o non è chiaro.

    Il test HALO si basa sul metodo SCD (brevettato da Halotech). Ad oggi, questo metodo è attivamente utilizzato nella pratica clinica ed è coinvolto in molti studi clinici. HALO è considerato un test più sensibile rispetto agli altri.

    Il valore di riferimento (norma) per questo test è del 20% e inferiore.

    Ciò significa che lo sperma con frammentazione del DNA deve essere inferiore al 20% del totale.

    Come viene eseguito il test HALO?


    L'assistente di laboratorio mescola lo sperma con uno speciale reagente, iniziando così il processo di denaturazione del DNA e quindi di colorazione. Se il DNA dello sperma non è danneggiato (non frammentato), si forma un chiaro "alone" attorno al nucleo centrale del dense centrale. Se il DNA spermatico è frammentato, allora non c'è alone, anche se si manifesta, è molto sottile e poco chiaro. Questo è chiaramente visto al microscopio quando uno spermatologo-embriologo trova lo sperma con DNA frammentato. Il risultato del calcolo è espresso in percentuale e normalmente non dovrebbe essere superiore al 20%.

    Per il test di completezza, lo spermogramma e l'EMIS (esame al microscopio elettronico degli spermatozoi) vengono di solito eseguiti in parallelo con l'analisi della frammentazione del DNA. Se sono stati fatti prima, ma non più di 3 mesi fa, mostrali al tuo medico per la consultazione. Tutte e 3 le analisi possono essere effettuate da una singola porzione di sperma.

    Come prepararsi per lo studio?

    La preparazione implica l'astinenza per 2-5 giorni.

    Il metodo di raccolta dell'eiaculato - la masturbazione.

    Contenitore per la raccolta di eiaculato - contenitore sterile (gratuito presso l'amministratore del laboratorio)

    Immediatamente prima di raccogliere il materiale, è necessario svuotare il contenuto della vescica e lavare i genitali.

    Se il test viene eseguito ripetutamente, la durata dell'astinenza dovrebbe essere sempre la stessa. Questo è importante per confrontare i risultati nel tempo.

    Se il campione viene raccolto a casa, il corriere deve essere trasportato in laboratorio in una scatola termica.

    Risultato del test HALO e sua decrittazione

    Dopo lo studio, viene formato il protocollo di test HALO, in cui è indicato l'indice di frammentazione del DNA.

    Le seguenti sono le opzioni per i risultati e le raccomandazioni per le tattiche di trattamento. Queste raccomandazioni si basano su ricerche condotte da veri gruppi scientifici negli ultimi 10 anni. Questa è una preziosa esperienza di ricerca, ma è solo una raccomandazione. Interpretare i risultati se il medico e in base alla storia della malattia per offrire opzioni di trattamento.

    Cosa mostra l'indice di frammentazione del DNA? Riflette il rapporto percentuale tra spermatozoi "sani" e spermatozoi con lacune nelle catene del DNA.

    Se il risultato HALO è superiore al 50%, si consiglia di utilizzare la tecnologia ICSI. Con tali risultati, ICSI sarà più efficace di IVF.

    Se il risultato è superiore al 60%, le possibilità di gravidanza anche con l'uso di tecnologie di riproduzione assistita sono estremamente basse. È meglio usare lo sperma del donatore.

    Se l'indice di frammentazione del DNA spermatico è pari o superiore al 50%, la gravidanza è improbabile, anche quando si utilizzano tecnologie riproduttive.

    Quando ottieni il risultato del test HALO, devi assolutamente contattare un andrologo per ricevere aiuto.

    Frammentazione del DNA spermatico - causa dell'infertilità

    Una delle cause dell'infertilità maschile è il danneggiamento (frammentazione) del filamento di DNA situato nel nucleo della testa dello sperma. È in questa molecola di acido nucleico che tutte le informazioni genetiche sono codificate e memorizzate, che al momento del concepimento vengono trasmesse al bambino. E più le interruzioni del genere sono nella molecola del DNA, minore è la probabilità di fecondazione dell'uovo da parte dello spermatozoo.

    Frammentazione del DNA: cosa mostra lo spermogramma?

    Spermogramma - il gold standard della valutazione primaria della qualità dello sperma. Gli standard dello sperma non sono stati rivisti dal 2010. Con l'introduzione della valutazione della morfologia di Kruger, questa analisi ha raggiunto il suo massimo valore diagnostico. Tuttavia, fino ad ora, lo spermogramma non può spiegare nemmeno la metà dei casi di infertilità maschile. Pertanto, gli specialisti della fertilità hanno dovuto cercare altri metodi di ricerca più approfonditi e più specifici.

    È impossibile diagnosticare le rotture del DNA durante lo spermogramma. Gli spermatozoi con DNA danneggiato di solito mantengono una buona mobilità. A volte sono anche in grado di fecondare, ma la gravidanza che ne deriva si interrompe o viene interrotta nelle prime fasi.

    Negli ultimi 10 anni, la scienza ha verificato che il danno del DNA spermatico è direttamente correlato a fecondazioni alterate, ritardi nello sviluppo embrionale, impianto inadeguato e aborti spontanei. ie con tutte le difficoltà dell'insorgenza e l'inizio della gravidanza.

    Ho un buon seme. Nessuna prospermia rilevata. Perché devo fare un'analisi sulla frammentazione dello sperma?
    Gli studi condotti nel 2016 hanno mostrato che il 10% degli uomini con letture di sperma normali aveva un indice di frammentazione del DNA spermatico elevato e si trovava nella categoria dei pazienti con infertilità idiopatica (vale a dire, infertilità per ragioni sconosciute). Pertanto, è probabile che tu abbia un caso simile. E poi il tuo sperma con normale motilità e morfologia aumenterà le possibilità di una gravidanza di successo.

    A chi viene prescritto il test di frammentazione del DNA?

    Indicazioni per la prescrizione di test per la frammentazione del DNA:

    • infertilità maschile idiopatica (inspiegabile)
    • aborto mancato (sviluppo ritardato dell'embrione)
    • ECO ICSI ripetuto e non riuscito
    • aborti ricorrenti
    • varicocele
    • gli uomini hanno 45 anni o più

    Inoltre, il test di frammentazione del DNA viene eseguito prima di congelare lo sperma del donatore per valutare la sua qualità e durante la preparazione per la fecondazione in vitro (FIV) (in vitro) o ICSI (iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi).

    Analisi della frammentazione del DNA e ART (IVF, ICSI)

    L'analisi della frammentazione del DNA aiuta a determinare quali dei metodi di tecnologia riproduttiva assistita (ART) aiuteranno una coppia particolare. Ad esempio, l'inseminazione intrauterina (IUI) e la fecondazione extracorporea aiuteranno le coppie con un danno al DNA basso e medio in un uomo. E le coppie con un alto livello di danno al DNA aiuteranno ICSI.

    L'unico gruppo di coppie per cui l'analisi del danno del DNA è inutile è quello in cui l'oligoastenoterozoospermia è stata diagnosticata e confermata in un uomo (cioè 3 prospermia in una sola volta). Solo l'ICSI può aiutare queste coppie e un andrologo esperto può dirlo immediatamente.

    L'analisi della frammentazione del DNA è necessaria per le coppie con infertilità maschile idiopatica. ie quando la diagnosi stabilisce che la ragione è in un uomo, tuttavia, non può spiegare la ragione, fare una diagnosi e prescrivere un trattamento. Per una coppia con infertilità maschile idiopatica, la frammentazione del DNA aiuterà a risparmiare tempo senza spenderlo su tentativi di fecondazione in vitro senza successo, regimi di trattamento inefficaci e rafforzamento generale del corpo. Non perdere tempo con l'eccitazione vuota, la disperazione e l'attesa vuota.

    Perché il DNA spermatico è frammentato?

    Uno dei meccanismi più studiati di danno alle catene del DNA è l'azione dei radicali liberi (specie reattive dell'ossigeno). Ossidano la molecola del DNA, causandone il danneggiamento.

    Per chiarire: Tutti gli uomini hanno radicali liberi e danni al DNA. Ma normalmente non ci sono molti di questi danni, ma i radicali liberi devono resistere agli antiossidanti.
    Gli antiossidanti proteggono gli spermatozoi assorbendo i radicali liberi. Sono ricchi di plasma seminale - un liquido in cui gli spermatozoi "galleggiano".

    Per scoprire quanti di questi radicali liberi potenzialmente pericolosi nello sperma di un uomo, eseguire lo studio delle forme reattive dell'ossigeno nell'eiaculato nativo (ROS) (cioè com'è) o lo studio delle forme reattive dell'ossigeno nello sperma lavato (ROS), lavando lo sperma dal seminale plasma. Che tipo di test dovrebbe essere effettuato - il medico può dire.

    Per scoprire quanto gli antiossidanti resistono ai radicali liberi, analizza l'attività antiossidante del plasma seminale.

    1. Fattori esterni:

    • radiazioni e prodotti chimici tossici
    • infezioni precedenti, comprese le infezioni trasmesse sessualmente,
    • condizioni climatiche avverse e ambientali nella zona di residenza,
    • stress e dieta malsana
    • fumo, abuso di alcool,
    • varicocele,
    • età di un uomo sopra i 40-45 anni
    • malattie croniche del tratto urogenitale,
    • chemioterapia
    • predisposizione genetica.

    2. Fattori interni:

    • maturazione incompleta delle cellule riproduttive maschili,
    • normalmente, il corpo maschile respinge la maggior parte degli spermatozoi di scarsa qualità, e solo alcuni di loro entrano nell'eiaculato. Se per qualche ragione si verifica un malfunzionamento nel lavoro del sistema di rigetto, ci sono molte più cellule germinali "malate" nello sperma. La qualità dell'eiaculazione non ne risente, ma la probabilità di successo della fertilizzazione è ridotta.

    Ci sono dati provenienti da studi che confermano che un ovulo fecondato da una cellula spermatica con DNA frammentato può "curarlo" e ripristinare la struttura genetica danneggiata. Ma il successo di tale "trattamento" è determinato, prima di tutto, dall'età biologica e dallo stato di salute della donna. Solo le uova giovani, che hanno un alto potenziale di riparazione del DNA degli spermatozoi, sono in grado di eliminare tale difetto. Inoltre, il grado di distruzione e la natura del danno alle strutture genetiche sono di grande importanza.

    Saggi di frammentazione del DNA dello sperma: HALO o TUNEL?


    L'indice di frammentazione, in contrasto con lo spermogramma, mostra violazioni dell'integrità dei filamenti di DNA. Il DNA danneggiato può essere spesso negli uomini con buoni risultati spermatici. Потому что сама молекула ДНК никак не влияет на основные параметры, тестируемые при анализе спермограмма: морфология, подвижность, количество сперматозоидов.

    Как только была обнаружена значимая взаимосвязь фрагментации ДНК с проблемами на ранних сроках беременности, начался настоящий бум в разработке методик. Новые методы анализа и исследований фрагментации ДНК появляются каждый год. Все они проходят клинические исследования, доказывают свою диагностическую значимость. В лаборатории SPERMA-TEST.ru определение Индекса Фрагментации ДНК проводится методом HALO (HALOSPERM).

    Что такое TUNEL-тест?

    Tunel-test è un esame microscopico di sperma, il cui scopo è quello di rilevare lo sperma con DNA danneggiato e contare il loro numero.

    Il metodo consente di stimare la scala del danno al DNA nello sperma. Lo sperma è mescolato con un reagente speciale. Inizia la reazione enzimatica. Le rotture delle catene di DNA dello spermatozoo sono riempite con un nucleotide marcato a fluorescenza. Questo è visto al microscopio quando uno spermologo trova lo sperma con DNA frammentato.

    Un altro 2-3 anni fa, il test TUNEL è stato utilizzato ovunque. Tuttavia, è stato un test lungo e laborioso. Ora il test HALO è considerato più sensibile e informativo, il che è confermato da studi clinici. E la scadenza rispetto a TUNEL è diminuita di 5-7 volte. Pertanto, nel nostro laboratorio, lo usiamo.

    Il test HALO è un'alternativa completa al test TUNEL. Nuovo test più veloce ed efficiente. Pertanto, si consiglia di utilizzarlo.

    Per passare l'analisi sulla frammentazione del DNA (HALO): indirizzo, prezzo, termini del laboratorio.

    Il test HALO è uno studio che viene eseguito al meglio in un laboratorio specializzato, dove lavorano gli spermatologi e gli embriologi, piuttosto che i normali tecnici di laboratorio, sono seguiti gli standard internazionali per la ricerca ei principi della medicina basata sull'evidenza. Gli andrologi e gli specialisti della fertilità non si fidano dei risultati dei laboratori di rete.

    Puoi prendere lo sperma per il test HALO nel laboratorio di spermatologia Sperma-test.ru.
    Costo del test HALO (alternativa a TUNEL) - 6900 p.
    Indirizzo del laboratorio in cui è possibile effettuare l'analisi:

    Mosca, 2 ° passaggio Kozhukhovsky, 12, p. 14, MK ECO "Karmenta"

    È possibile fissare un appuntamento e porre una domanda per telefono: +7 (495) 787-79-30.

    La procedura per lo studio della frammentazione del DNA nello sperma

    L'uomo dà l'eiaculato, il materiale risultante è posto in una composizione speciale, e quindi le cellule vengono analizzate sotto potenti apparecchiature ottiche e gli spermatozoi sono contati con e senza frammentazione del DNA.

    Gli indicatori di studio di uomini sani in grado di fecondare - meno del 15% di spermatozoi con alterata integrità del DNA, nel caso di infertilità maschile, il numero di spermatozoi patologici nell'eiaculato supera il 30%. In questo caso, la probabilità di gravidanza senza l'uso del metodo IVSI ICSI e delle sue modificazioni è estremamente bassa e aumenta anche la probabilità di una gravidanza non in via di sviluppo.

    Indicazioni per lo studio del livello di frammentazione del DNA spermatico

    • Infertilità accoppiata
    • varicocele,
    • Aborto spontaneo,
    • Tentativi di FIV falliti,
    • Deviazioni nello sperma,
    • Preparazione per l'uso delle tecnologie di riproduzione assistita (IVF, ICSI),
    • Malattie infiammatorie croniche del sistema urinario maschile.

    L'infertilità maschile è l'incapacità di un uomo di concimare una donna, l'assenza della gravidanza desiderata in una coppia durante i regolari tentativi di concepimento per 1 anno. Se l'età della futura madre ha più di 35 anni, l'assenza di gravidanza durante la normale vita sessuale senza l'uso di metodi contraccettivi per più di 6 mesi può essere diagnosticata come infertilità.

    Se la gravidanza nella coppia non si verifica, vale la pena contattare uno specialista - andrologo e sottoporsi a un complesso di sondaggi. Lo studio della frammentazione del DNA negli spermatozoi è una componente obbligatoria dell'esame in violazione della fertilità maschile nella "Madre e figlio". L'esame completo include:

    • Esame primario dell'andrologo,
    • Esame dello sperma: spermogramma, test MAR, esame al microscopio elettronico dello sperma (EMIS), ricerca sulla frammentazione del DNA nello sperma,
    • Esame ormonale: un esame del sangue per il livello degli ormoni tiroidei, degli ormoni sessuali e dell'ormone "stress" - prolattina,
    • Esame genetico: cariotipo, studio di mutazione nel gene CFTR (gene della fibrosi cistica), studio del locus AZF nel cromosoma Y,
    • Esame ecografico (ecografia): scroto, prostata, dopplerometria (eseguita da un andrologo).

    Sulla base dei risultati della diagnosi, viene creato un programma di trattamento individuale. Ogni programma per il trattamento dell'infertilità maschile nella "Madre e figlio" è creato dall'interazione di medici di varie specializzazioni sotto la guida di andrologo e specialista della riproduzione. L'approccio collettivo ci consente di ottenere i migliori risultati nella scelta delle tattiche di trattamento e il raggiungimento della gravidanza in una coppia.

    Guarda il video: Spermatozoi : le frammentazioni del DNA (Febbraio 2020).

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